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应用层是OSI的最高层，这一层的协议都与应用进程间的通信有关。已经定义的OSI应用层协议主要有5种：OSI的电子邮件标准（ISO 10021）叫作MOTIS，它是根据CCITT的X.400建议制定的；OSI的文件传输协议（ISO 8571和ISO 8572）叫作FTAM，这是一个适用于各种文件类型的功能很强的文件访问协议；OSI的目录服务（DS）协议来源于CCITTR X.500系列协议，提供分布式数据库功能；OSI的虚拟终端（VT）协议定义了表示实际终端抽象状态的数据结构，用于解决各种终端不兼容的问题；关于网络管理，OSI指定了公共管理协议（CMIP）和公共管理信息服务（CMIS）。
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